Publicado no Encontro de Saberes 2015
Evento: XXIII Seminário de Iniciação Científica
Área: CIÊNCIAS DA VIDA
Subárea: Biologia Geral
Título |
GERAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE CLONES ESTÁVEIS DE HEPATÓCITOS COM EXPRESSÃO CONTROLADA DA PROTEÍNA NS1 DE DENGUE VIRUS |
Autores |
RAFAEL SOUZA LEOPOLDINO NASCIMENTO (Autor) ANA CLAUDIA ALVARENGA CARNEIRO (Autor) BRENO DE MELLO SILVA (Orientador) |
Resumo |
O genoma dos Dengue virus codificam para proteínas estruturais, que compõem a estrutura da partícula viral, e proteínas não estruturais que estão envolvidas primariamente com as etapas intracelulares de multiplicação viral, dentre as quais destaca-se a NS1. Após sua síntese, NS1 se associa às membranas onde ela permanece como a única proteína viral em células infectadas podendo atuar na modulação de funções celulares. Dados obtidos por nosso grupo, sugerem que a expressão de NS1 altera o perfil de ativação da via das MAP quinases e de proteínas da via NF-kB. Estas vias, como muitas outras, são ativadas junto à membrana plasmática em resposta a estímulos extracelulares. Estes estímulos são oriundos de proteínas com domínios transmembrana ou por proteínas ancoradas por ancoras GPI associadas a microdomínios de membrana denominados lipid rafts bem como de caveolas onde, segundo dados da literatura, NS1 encontra-se associada. Tais dados, somados a dados preliminares de nosso grupo demonstrando a alteração da distribuição da proteína caveolina-1 (principal marcador de caveolas) em células HepG2 expressando NS1, sugerem que esta proteína possa estar causando as alterações em vias sinalizadoras nestas células. Para estudar a interação entre proteína NS1 e caveolina-1, propomos a geração de células com a capacidade de expressar a proteína NS1 ou a proteína caveolina-1 de forma controlada. Para isso, uma sequência codificadora para a proteína caveolina-1 foi projetada para ser sintetizada e clonada no vetor pMEP4 que expressa os genes nele inseridos em resposta a adição de metais no meio de cultura. Em seguida, células HepG2 foram transfectadas com esta construção gênica e os clones gerados estão sendo selecionados pela resistência a higromicina. A clonagem do gene da proteína NS1 continua em andamento. A obtenção destes clones será útil na identificação do mecanismo pelo qual a proteína NS1 modula funções celulares e no estudo do papel de caveolina-1 na biologia viral. |