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Publicado no Encontro de Saberes 2015

Evento: XXIII Seminário de Iniciação Científica

Área: CIÊNCIAS DA VIDA

Subárea: Nutrição

Título
AVALIAÇÃO DA EFICÁCIA DA EXTRAÇÃO DE DNA DE T. CRUZI EM TECIDO PARAFINADO DE ANIMAIS INFECTADOS UTILIZANDO A TÉCNICA DE EXTRAÇÃO ORGÂNICA COM CTAB/CLOROFÓRMIO/ÁLCOOL ISOAMÍLICO E O KIT WIZARD GENOMIC DNA PURIFICATION (PROMEGA)
Autores
NAYARA RESENDE GOMES (Autor)
VANJA MARIA VELOSO (Orientador)
GLENDA NICIOLI DA SILVA (Co-Autor)
DAIANE TEIXEIRA DE OLIVEIRA (Colaborador)
LEVI EDUARDO SOARES REIS (Colaborador)
CLAUDIA MARTINS CARNEIRO (Colaborador)
Resumo
Com o avanço científico na área da Biologia Molecular houve a possibilidades de se fazer releitura de material biológico processado, incluído em blocos de parafina e arquivado em laboratórios. Dentre as técnicas utilizadas para esse fim, a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) se destacou e passou a ser uma ferramenta muito importante. A avaliação da presença de DNA em amostras de tecidos de animais tratados ou não pode confirmar resultados de inúmeros outros testes, corroborando assim com a avaliação da cura parasitológica. Como tecidos processados em formol e incluídos em parafina apresentam alto grau de fragmentação de DNA, é necessário utilizar um processo de extração menos agressivo e mais eficaz. A remoção da parafina do material a ser extraído também se faz necessária, visto que é um fator crítico e interferente nos resultados. Sendo assim, esse estudo teve como objetivo avaliar e comparar qualitativamente e quantitativamente a eficácia da extração de DNA proveniente de tecido de cães e camundongos infectados com T. cruzi, fixados e emblocados em parafina. Para isso, foram utilizados o protocolo In House (extração orgânica com CTAB/clorofórmio/álcool isoamílico) e o Kit Wizard Genomic DNA Purification (Promega). A concentração de DNA obtida pelas diferentes metodologias não apresentou diferenças significativas. Das vinte e quatro amostras analisadas, aproximadamente 59% dessas apresentaram maior concentração do DNA extraído utilizando o protocolo de extração orgânica. Entretanto, não foi possível visualizar fragmentos de DNA T. cruzi nas amostras extraídas com o protocolo In House após a realização da eletroforese capilar.  Porém, várias amostras processadas pelo Kit apresentaram resultados positivos. Conclui-se que, apesar da extração pela técnica In House ter melhor rendimento de DNA em comparação ao Kit Wizard Genomic DNA Purification, esta metodologia parece ser mais agressiva, não sendo possível a amplificação dessas amostras devido a degradação do DNA.
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